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革兰氏染色的方法
TOwCms演示 / 2019-10-02 01:26:57

 

       细菌先经碱性染料结晶紫染色,再经碘液媒染(以增加染料与细胞的亲和力)后,用酒精或丙酮脱色,再用复染色剂染色。不被脱色而保持原颜色者为革兰纸阳性菌(G+);被脱色后又被染上复染剂的颜色者为革兰氏阳性菌(G-)。此法可将细菌分为两大类。
    革兰氏染色的机理主要是利用两类细菌的细胞壁成分和结构不同。革兰氏阴性菌的细胞壁中含有较多的类脂质,而肽聚糖的含量较少。当用乙醇或丙酮脱色时,类脂质被溶解,增加了细胞壁的通透性,使初染后的结晶紫和碘的复合物易于渗出,结果细胞被脱色,经复染后,又染上复染液的颜色;而革兰氏阳性菌细胞壁中肽聚糖的含量多且交联度大,类脂质含量少,经乙醇或丙酮洗脱后,肽聚糖层的孔径变小,通透性降低,因此,细胞仍保留初染时的颜色。

【实验材料、药品及器具】
   1、菌种:大肠杆菌(Escherichia coli),枯草芽孢杆菌(Bacillus Subtilis),金黄色葡萄球菌(Staphylococeus auresu)
   2、染液:草酸铵结晶紫液,革兰氏碘液,95%的酒精,藏花红液
   3、器皿洗净的载玻片6片、显微镜、酒精灯、接种环、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、镊子、玻璃缸、瓶装蒸馏水
【实验步骤】
   1、取培养12-24h的大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌分别涂片、固定。
   2、加草酸铵结晶紫染色剂一滴,染色1分钟。
   3、倾去染液并用洗瓶装水轻轻冲洗。
   4、加碘液染1分钟,水洗,然后用吸水纸吸干。
5、将载玻片略倾斜,滴加95%酒精脱色(洗至流下的酒精中无紫色时为止),然后水洗。
6、加藏花红复染,染色30分钟,水洗,用吸水纸吸干或烘干。
7、用油镜镜检观察。

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